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單細(xì)胞分選要考慮哪些問題?
閱讀次數(shù):528 發(fā)布時間:2020/10/27 9:55:22
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細(xì)胞分選技術(shù),即利用優(yōu)化后的高通量測序技術(shù)分析每一個單個細(xì)胞的序列信息,從而更高分辨率地揭示細(xì)胞間的細(xì)胞差異以及其在微環(huán)境中的功能情況。

那么問題就來了:

1.如何獲得單個細(xì)胞?如果無法獲得單個細(xì)胞這一切都是不成立的。

2.如何獲得大批量 的單個細(xì)胞?單組織細(xì)胞群體在10E6以上,如果被檢測的測序細(xì)胞數(shù)量過小精確度不足。

3.如何低成本地獲得大批量單個細(xì)胞?單細(xì)胞測序成本高,尤其是需要測2000~3000個以上的細(xì)胞的時候,如果單個細(xì)胞的分選成本也很高,技術(shù)根本無法普及。

眾所周知傳統(tǒng)的生物學(xué)分析方法常見的研究對象就屬群體細(xì)胞了,可這么一來使得細(xì)胞之間的生物學(xué)差異可能會相互掩蓋,生物信息容易消失在大背景中。由于基因隨機(jī)表達(dá)的細(xì)胞異質(zhì)性,很難解釋細(xì)胞和細(xì)胞之間的在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的差異,所以在單細(xì)胞層面研究基因組學(xué)、表觀基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)就顯得尤為重要了。

但要通過流式分選出足夠多的符合要求的單細(xì)胞進(jìn)行下游實驗并沒有那么容易。下面三方面是必須要考慮的問題:

1、活性

細(xì)胞活性狀態(tài)對后續(xù)實驗而言很重要,就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例,高通量表達(dá)譜芯片技術(shù)需要高質(zhì)量的RNA樣本,細(xì)胞活性不好或死細(xì)胞會直接導(dǎo)致RNA降解,實驗無法繼續(xù)。

2、精度

流式分選是精密度超高的儀器,稍稍不同的參數(shù)(激光、液流等)的設(shè)置都會直接造成結(jié)果偏差;另外既然是想研究單細(xì)胞,那么就得確保單細(xì)胞分選得到的確為單個細(xì)胞,否則同樣沒有意義。

3、效率

自動化替代人工無疑是提高效率、節(jié)省成本的有力舉措;當(dāng)你需要分選超低含量的細(xì)胞時,務(wù)必是個長時間工程,鞘液用光時,其更換繁瑣度、耗時、連續(xù)性等都是需要考慮的
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