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技術(shù)文獻(xiàn)

血細(xì)胞化學(xué)染色的常見染色方法
閱讀次數(shù):10 發(fā)布時間:2025/4/23 10:25:04
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  1.過氧化物酶染色(POX)

  (1)原理:過氧化物酶能分解過氧化氫而釋放出新生態(tài)氧,使無色聯(lián)苯胺氧化成藍(lán)紫色,后者與硝普鈉結(jié)合形成藍(lán)黑色的顆粒,沉淀于細(xì)胞質(zhì)中。

 。2)操作方法:將固定液滴加在新鮮骨髓或血涂片上,固定30,流水沖洗,晾干。將應(yīng)用也滴加在血膜上,作用10~15分鐘,流水沖洗。用蘇木素或吉姆薩液復(fù)染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。

  (3)正常參考范圍:陰性。

  (4)臨床意義:急性粒細(xì)胞白血病時,白血病細(xì)胞多呈強(qiáng)陽性;急性單核細(xì)胞白血病呈弱陽性或陰性;急性淋巴細(xì)胞白血病呈陰性反應(yīng)。主要用于急性粒細(xì)胞白血病和急性淋巴細(xì)胞白血病的鑒別。

  2.α-醋酸萘酚酯酶染色(α-NAE)

 。1)原理:α-醋酸萘酚酯酶能將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解,產(chǎn)生α-萘酚,再與重氮染料偶聯(lián),可形成不溶性的有色沉淀,沉淀于細(xì)胞質(zhì)中。

 。2)操作方法:將甲醛生理鹽水滴加在2張新鮮骨髓或血涂片上固定5分鐘,或用甲醛蒸汽固定5~10分鐘后,流水沖洗,晾干。將2張涂片分別放入兩份基質(zhì)液中,置于37℃水浴60分鐘,流水沖洗。甲基綠溶液復(fù)染5~10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。

 。3)正常參考范圍:陰性。

 。4)臨床意義:急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞呈強(qiáng)陽性,但由于α-醋酸萘酚酯酶的活性會被氟化鈉抑制,故染色時常同時做氟化鈉抑制試驗。急性粒細(xì)胞白血病時,呈陰性或弱陽性,不被氟化鈉抑制。主要用于急性單核細(xì)胞白血病與急性粒細(xì)胞白血病的鑒別。

  3.中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色(NAP)

 。1)原理:中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶在pH 9.6左右環(huán)境中,能水解磷酸萘酚鈉底物釋放出萘酚,后者與重氮染料偶聯(lián),可形成不溶性的有色沉淀(紅色顆粒),定位于細(xì)胞酶活性所在處。

 。2)操作方法:將固定液覆蓋于新鮮血片30~60,流水沖洗,晾干。將涂片置基質(zhì)液,或漿基質(zhì)液直接滴加在血膜上,37℃水浴45分鐘,流水沖洗,晾干。甲基綠復(fù)染5~10分鐘,流出沖洗,晾干鏡檢。

  (3)正常參考范圍:中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶陽性率為10%~40%;中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶指數(shù)為35~70分。

 。4)臨床意義:中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶活性增高可見于細(xì)菌性感染、類白血病反應(yīng)、再生障礙性貧血、急慢性淋巴細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤等;活性下降見于慢性粒細(xì)胞白血病、陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥、骨髓增生異常綜合征等。可用于慢性粒細(xì)胞白血病和類白血病反應(yīng)的鑒別、細(xì)菌性感染與病毒性感染的鑒別、再生障礙性貧血與陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥的鑒別等。

  4.鐵染色

 。1)原理:人體內(nèi)有一定量的以鐵蛋白和含鐵血黃素形式貯存的鐵元素,這些鐵在酸化的低鐵氰化鉀溶液中反應(yīng),生成藍(lán)色的亞鐵氰化鐵沉淀(普魯士藍(lán)),定位于含鐵的部位。

 。2)操作方法:將染色液滴加在骨髓小粒豐富的骨髓涂片上,室溫20~30分鐘,流水沖洗,晾干,觀察中幼紅細(xì)胞、晚幼紅細(xì)胞胞質(zhì)中的鐵。

  (3)正常參考范圍:細(xì)胞外鐵,“+”~“++”;細(xì)胞內(nèi)鐵,鐵粒幼細(xì)胞陽性率19%~44%,以Ⅰ型為主,少數(shù)為Ⅱ型。

 。4)臨床意義:是目診斷缺鐵性貧血及指導(dǎo)鐵劑治療的檢驗方法。對骨髓增生異常綜合征分型的診斷也有意義。

  5.糖原染色(PAS)

  (1)原理:過碘酸將血細(xì)胞內(nèi)的糖原氧化,生成醛基。醛基與雪夫液中的無色品紅結(jié)合,形成紫色化合物,定位于細(xì)胞質(zhì)中。

 。2)操作方法:干燥涂片,滴加甲醛固定液固定10分鐘,流水沖洗,晾干。滴加過碘酸溶液作用20分鐘,流水沖洗,晾干。滴加雪夫液作用60分鐘,流水沖洗,晾干。滴加甲基綠溶液復(fù)染10分鐘,流水沖洗,晾干鏡檢。

 。4)臨床意義:根據(jù)染色陽性程度和陽性物形態(tài)鑒別主要用于急性淋巴細(xì)胞白血病和急性非淋巴細(xì)胞白血病鑒別,還有助于紅白血病與巨幼細(xì)胞貧血和溶血性貧血的鑒別診斷。

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